项目名称：人巨细胞病毒多价基因工程抗原及检测试剂的研制和应用

完成单位：南京军区军事医学研究所

完成人：李越希、郭四新、王忠灿、潘英、李素芹

一、项目概况：

项目起止时间：1998－01－01～2007－01－1

项目资助：江苏省社会发展计划资助4万元，公司投资450万元。

国内外研究进展：人巨细胞病毒（HCMV）感染人体危害严重，可致胎儿畸形、器官移植失败、艾滋病患者死亡等。早期诊断是防治HCMV感染的重要手段，建立HCMVIgM抗体检测试剂，应用血清学方法进行早期诊断，对优生优育和防止器官移植的失败具有重要意义。国外研制的检测抗HCMV－IgM抗体的ELISA试剂，使用的抗原为单个或多个蛋白的混合抗原，并不是将抗原表位融合在一起。存在假阳性、确定多个抗原的混合比例较繁琐、多个抗原要分别标记等缺点。细胞培养的HCMV抗原，与其他病毒成分有交叉，易产生假阳性。

研究目的与方法：本研究利用生物信息学、基因工程技术，从HCMV的多个蛋白内筛选出强抗原表位，研制重组HCMV多价融合抗原，并用之研制特异性好、敏感性高的HCMVIgM抗体检测试剂，解决临床应用和流行病学调查需要。

二、项目研究结果和结论：

从人巨细胞病毒gp52蛋白和pp150蛋白内筛选出强抗原表位。利用多个分子生物学软件分析，确定了人巨细胞病毒gp52蛋白和pp150蛋白的强抗原表位。PCR扩增及选用细菌偏爱密码子化学合成含抗原表位的基因片段，利用基因工程及基因突变技术，制备了可溶性的gp52和pp150蛋白的抗原表位融合蛋白。表达的重组融合蛋白以可溶性形式存在，有很好的抗原性和特异性。将串联的gp52及pp150蛋白基因再次重复串联，表达制备含了含有四个蛋白片段的融合蛋白。该重组多价抗原覆盖了病毒抗原的主要表位，去除了非特异蛋白片段，分子量大、抗原性强、特异性好、尤其适合酶标记和金标等。获国家发明专利。利用表达的多价基因工程抗原，研制了捕获法人巨细胞病毒抗体检测试剂盒，获国家新药证书及生产文号。

三、项目推广应用情况：

多价基因工程抗原及试剂盒的研制均达经过了实用的验证。研制的试剂盒操作方便，适用于大量样本检测，易于推广，已在全国应用多年，用于孕妇的检测、献血员的筛查及临床检测等，对优生优育及预防疾病流行有重要意义。获得了较大的经济效益和社会效益。研制的抗原和试剂盒可替代进口试剂。发表论文8篇，培养研究生4名。